免疫胶体金的应用1、胶体金在光镜水平、电镜水平的应用直径为3~15nm胶体金均可用作电镜水平的标记物。优点是可以通过应用不同大小的颗粒进行双重或多重标记。胶体金用于光镜水平、电镜水平的研究,主要包括:①细胞悬液或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内抗原的检测。③组织切片中抗原的检测。2、胶体金在流式细胞仪中的应用应用胶体金标记的抗体,分析细胞表面抗原。胶体金可以明显地改变红激光散射角,区分不同的标记,能同时进行几种标记。3、凝集试验单分散的免疫金溶胶清澈透明。与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚,溶胶颗粒增大、沉降,光散射随之发生变化,溶液的颜色发生变化。4、免疫印迹技术用聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白质分离,得到的区带转移至硝酸纤维素膜,与特异性的抗体保温后,再与胶体金标记物温育,根据膜上胶体金颗粒颜色深浅可测知样品中的特异性抗原。金免疫印迹技术有相当高的灵敏度。采用免疫金银染色法,灵敏度可低至。快捷的仪器校准方案。河南读数仪批发价
继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)之后,一种固相标记免疫测定技术--免疫胶体金技术(Immunecolloidalgoldtechnique,ICG)逐渐发展起来。它是以胶体金作为标记物,利用抗原抗体特异性反应,对抗原或抗体物质进行定性乃至定量研究的标记技术。近年来,该技术因其操作简便、观察直观、灵敏度高、价格低廉等优点在医学、动植物检疫以及食品安全监督等各领域均得到了多方面的应用。胶体金即金的水溶液,是指分散相粒子直径在1-100nm的金溶胶。由氯化金溶液在还原剂作用下,金离子还原成金原子,从而凝合形成特定大小的金颗粒,因其中正负离子组成胶粒的双电子层结构,从而使溶胶处于稳定状态,故称胶体金。河南读数仪批发价胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。
从亲和层析柱上洗脱下的高亲和抗体应该是高亲和抗体,从而可以产生高特异性的胶体金结合物。这些抗体可能需要进一步的处理以避免交叉反应。虽然亲和纯化法耗费大量的时间、经费、血清,但是通过该方法可以获取任何免疫分析必需的关键原料——高质量的结合物。抗原的标记成功制备抗原标记物依靠两个因素:控制抗原与胶体金颗粒联接的三种氨基酸残基的空间位置和抗原大小。大多数的抗原标记物是被使用在快速检测试纸上,例如血清的双抗体夹心法或竞争法检测。在这种情况下,通常选择40nm胶体金颗粒。直到近期,研究人员发现,40nm胶体金颗粒标记的蛋白分子量下限为30KD.然而在某些条件下,通过先进的标记技术可以将该限制降低到一半至15KD.使用这些小颗粒标记的主要限制是被标记蛋白必须包含足够数量的赖氨酸、色氨酸和半胱氨酸残基。抗原常不含有足够的半胱氨酸残基,以至抗原和胶体金颗粒之间的结合力相对较弱且容易断裂,尤其在样本中存在高亲和力的抗体时。对于分子量低于30KD的抗原,通常采用其他技术方法,例如标记较小的胶体金颗粒。在检测线处由于胶体金颗粒过小使得可见度低很可能导致灵敏度降低。
胶体金溶液是指分散相粒子直径在l—150nm之间的金溶胶,属于多相不均匀体系,颜色呈桔红色到紫红色.胶体金作为标记物用于免疫组织化学始于1971年,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合.1974年Romano等将胶体金标记在第二抗体(马抗人IgG)上,建立了间接免疫胶体金染色法。1978年geoghega发现了胶体金标记物在光镜水平的应用。胶体金在免疫化学中的这种应用,又被称为免疫金.之后,许多学者进一步证实胶体金能稳定又迅速地吸附蛋白质,而蛋白质的生物活性无明显改变.它可以作为探针进行细胞表面和细胞内多糖、蛋白质、多肤、抗原、核酸等生物大分子的精确定位,也可以用于日常的免疫诊断,进行免疫组织化学定位,因而在临床诊断及药物检测等方面的应用已受到重视.目前电镜水平的免疫金染色(IGS),光镜水平的免疫金银染色(IGSS),以及肉眼水平的斑点免疫金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力工具.通过仪器辨别试纸条颜色变化,能够避免人为判读所造成的主观误差。
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